速倍林与马立克疫苗应用!

作者：尤永君 瑞普生物首席专家

马立克氏病（MD）是由疱疹病毒科细胞结合性（CA）马立克氏病病毒（MDV）引起鸡淋巴组织增生性肿瘤的一种高度接触性传染病，随着养鸡业集约化程度的提高，该病带来的危害也在日益增大，马立克氏病的预防成为养鸡业的重中之重。而雏鸡沙门氏菌和大肠杆菌等细菌病的高发，给养禽业造成了极大的经济损失，向疫苗稀释液中添加各种抗菌药物控制雏鸡早期细菌性感染的发病率已经成为生产中非常普遍的一种做法。为确保马立克氏病疫苗免疫后产生足够的免疫保护效力，避免抗生素不当添加造成疫苗病毒部分甚至完全丧失活力而导致马立克疫苗免疫失败，对速倍林分别与马立克疫苗锐雏欣和双欣立克联合应用作了下述论证和介绍。

目前研究表明在马立克氏病疫苗中添加头孢噻呋钠对疫苗稀释液的pH值不会造成明显变化，也不会造成疫苗效价的明显下降，多个品牌的药物说明书当中都明确推荐该药物可以按照适当的剂量直接添加到马立克氏病疫苗稀释液中，用于新生雏鸡常见细菌性病原早期感染的预防。马立克疫苗中添加0.1mg-0.2mg/羽份的头孢噻呋钠对马立克疫苗效价的影响不大。

应用案例

一、添加不同浓度的头孢噻呋钠后马立克疫苗在不同时间的效价变化

用10mL疫苗稀释液溶解头孢噻呋钠配制成100mg/mL的头孢噻呋钠母液。马立克氏病活疫苗（CVI988/Rispens株）从液氮罐中取出后立即按照常规使用方法稀释至工作浓度（病毒浓度约为3500 PFU/0.2 mL），从稀释好的病毒液中分别取出9份病毒液，10mL/份，然后向9份病毒液中依次迅速加入头孢噻呋钠溶液至终浓度分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg/mL（相当于每羽份病毒液中添加的头孢噻呋钠分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mg）。将加药后的病毒液在（25±2）℃温度下放置不同时间，分别于30min、45min和60min3个时间点取样进行疫苗蚀斑形成单位测定，结果如下。

头孢噻呋钠对马立克氏病疫苗效价的影响

注：a:平均值±标准误；∗表示该组与未添加头孢噻呋钠组相比测定的蚀斑数差异显著（P<0.05）；∗∗表示该组与未添加头孢噻呋钠组相比测定的蚀斑数差异极显著（P<0.01）。

结果显示，在稀释好的疫苗病毒液中添加0.1mg/羽份的头孢噻呋钠，25℃作用30min 和45min 对疫苗病毒蚀斑数没有显著影响，但作用60min后病毒蚀斑数与未添加药物组相比有所下降，且差异显著（P<0.05）。

二、添加0.2mg/羽份的头孢噻呋钠对马立克疫苗效价的影响

为评价注射用头孢噻呋钠及其稀释液对马立克疫苗效力的影响，以马立克疫苗蚀斑生成单位为指标，在体外通过马立克氏活疫苗与头孢噻呋钠及其稀释液分别作用0、30、60、90min 等4个时间点后接种到鸡胚成纤维细胞中孵育，测定疫苗蚀斑形成单位的变化。

结果表明，添加药物后的马立克疫苗在各个时间点蚀斑数与空白组之间没有显著性差异（P>0.05），头孢噻呋钠及其稀释液对疫苗效力无影响。

试验分组情况：

空白组：1000羽份的马立克疫苗（至少2000PFU/羽份）/100mL。

对照组：0.2g头孢噻呋钠对照品+1000羽份的马立克疫苗/200 mL(相当于0.2mg/羽份)。

试验组：0.2g头孢噻呋钠+1000羽份的马立克疫苗/200 mL(相当于0.2mg/羽份)。

配制好的马立克疫苗与头孢噻呋钠混合液在室温下作用0、30、60、90min等4个时间点后，取以上作用后的混合液用SPG液各进行10倍稀释，最终浓度为每0.2ml约含有200PFU，再用吸管吸取0.2ml稀释液加入单层鸡胚成纤维细胞中，待凝固后，将瓶倒置，继续培养7d，进行蚀斑计数。

各试验组在各时间点的蚀斑数值表

比较各组蚀斑形成单位的变化，在90min时，与空白组相比，各试验组的下降率在2%以上，对照组甚至达到4.73%；60min时试验组的下降率大于2%，60min以前各试验组的下降率大多数都低于2%。如果与马立克疫苗联合使用，必须在60min 内用完，以免影响使用效果。

三、不同厂家生产的头孢噻呋钠对马立克疫苗效价的影响

用马立克液氮苗稀释液将进口头孢噻呋冻干粉、某国产头孢噻呋冻干粉、国产庆大霉素进行稀释，使其终浓度分别为4mg/ml和8mg/ml。取出马立克液氮苗，融化后迅速加入上述稀释液中，使每0.2ml液体中含0.01羽份马立克疫苗，用pH计检测其pH值。然后分成三组，分别在放置30min、45min、60min后，吸取0.2ml稀释好的疫苗立即接种在长势良好的成纤维细胞上，每种抗生素接两瓶，置37℃、5%CO2 培养箱中培养24h，然后倒入凉至50℃含有5%小牛血清的199营养琼脂，每瓶3ml，待凝固后，倒置放入37℃、5%CO2 培养箱中继续培养7d，进行蚀斑计数。同时用不加抗生素稀释的疫苗接种成纤维细胞作为对照。

不同浓度的抗生素对马立克疫苗蚀斑行成单位的影响

在稀释液中加入4mg/mL的头孢噻呋冻干粉对马立克疫苗的蚀斑单位无明显影响。将抗生素浓度增加1倍后，蚀斑单位基本不变。但是疫苗稀释后放置时间对马立克蚀斑单位的形成有很大的影响，用加庆大霉素的稀释液将马立克疫苗稀释后，形成的蚀斑数与对照组有较大的差异，影响了疫苗的活性效价。

瑞普产品

一、速倍林

兽药名称

通用名称：注射用头孢噻呋钠

商品名称：速倍林

英文名称：Ceftiofur Sodium for Injection

汉语拼音：Zhusheyong Toubaosaifuna

主要成分：头孢噻呋钠

性状：本品为白色至灰黄色粉末或疏松块状物

药理作用

药效学：头孢噻呋属β-内酰胺类抗菌药，具有广谱杀菌作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌（包括产β-内酰胺酶菌）均有效。其抗菌机理是抑制细菌细胞壁的合成而导致细菌死亡。敏感菌主要有多杀性巴氏杆菌、溶血性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、链球菌、葡萄球菌等，某些铜绿假单胞菌、肠球菌耐药。本品抗菌活性比氨苄西林强，对链球菌的活性比氟喹诺酮类强。

药动学：头孢噻呋肌内和皮下注射吸收迅速且分布广泛，但不能透过血脑屏障。血中和组织中药物浓度高，有效血药浓度维持时间较长。在体内能生成具有活性的代谢物脱氧呋喃甲酰头孢噻呋（desfuroylceftiofur），并进一步代谢为无活性的产物从尿和粪中排泄。与抑制排泄的药物合用可提高血中药物浓度和延长半衰期。

药物相互作用：与青霉素、氨基糖苷类药物合用有协同作用。

适应症：用于雏鸡的大肠杆菌感染。

用法用量：皮下注射，1日龄鸡，每羽0.1～0.2毫克。

二、马立克活疫苗

1、锐雏欣（FC126株）

主要成分与含量：本品含鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒FC126株，每羽份所含蚀斑数≧2000PFU。

性状：本品为乳白色疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。

作用用途：适用于注射各种1日龄雏鸡，预防鸡马立克氏病。

用法用量：按瓶签注明的羽份，用稀释液稀释，肌肉或皮下注射0.2mL（含2000PFU）。

注意事项

• 已发生过鸡马立克氏病的鸡场，雏鸡应在出壳后立即预防接种。
• 疫苗应随配随用，用专用配套稀释液稀释疫苗。
• 疫苗稀释后放入盛有冰块的容器中，应1h内用完。

2、双欣立克：CVI988(Ⅰ型）+FC126(Ⅲ型）（1000羽/瓶+2000羽/瓶）

主要成分与含量：每羽份疫苗含鸡马立克氏病Ⅰ型毒株CVI988/Rispens 2000PFU和Ⅲ型毒株FC126 1000PFU)。

性状：融化后为淡黄色细胞悬液。

作用用途：用于预防鸡马立克氏病，各种品种1日龄雏鸡均可使用。

用法用量：按瓶签注明的羽份，用稀释液稀释，肌肉或皮下注射0.2mL。

CVI988主导保护，阻止病毒复制；FC126主导早期占位,阻止肿瘤形成。克服母源抗体对疫苗影响，为雏鸡提供多血清型保护。

注意事项

• 必须在液氮中保存及运输。
• 从液氮中取出后应迅速放于38℃温水中，待完全融化后再取出，加稀释液稀释，否则影响疫苗效力。
• 稀释好的疫苗必须在1h内用完。注射期间应经常摇动疫苗使其均匀。

速倍林与瑞普马立克疫苗联合应用方案

一、速倍林按0.1mg/羽份使用（预防雏鸡大肠杆菌、沙门氏菌等）

1、速倍林1g+10瓶锐雏欣+200mL疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下或肌肉注射0.2mL）

2、速倍林1g+10瓶双欣立克（1000羽/瓶）+200mL疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下或肌肉注射0.2mL）

3、速倍林1g+5瓶双欣立克（2000羽/瓶）+400mL疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下或肌肉注射0.2mL）

4、速倍林4g+20瓶双欣立克（2000羽/瓶）+400mL疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下或肌肉注射0.2mL）

二、速倍林按0.2mg/羽份使用（预防雏鸡大肠杆菌、沙门氏菌等）

1、速倍林1g+5瓶锐雏欣+200mL疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下注射0.2mL）

2、速倍林1g+5瓶双欣立克（1000羽/瓶）+疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下注射0.2mL）

3、速倍林4g+10瓶双欣立克（2000羽/瓶）+疫苗专用稀释液（1日龄雏鸡颈部皮下注射0.2mL）

添加头孢噻呋钠后马立克疫苗按说明使用，并于1h内使用完。

验证试验

进行速倍林与马立克疫苗联合应用对疫苗效价影响检测试验，分别检测按0.1mg/羽份和0.2mg/羽份添加速倍林后不同时间对马立克疫苗效价的影响，提供数据支持。

参考文献

张小荣,许秋阳,王义敏,等. 超量添加头孢噻呋对马立克氏病疫苗的危害性评估.中国家禽，2013,34:63-64。

周淑贞,辜垂鹏,孙永学. 马立克疫苗添加“澳赛康”及稀释液后对蚀斑生长的影响试验. 家禽科学, 2010,10:6-8。

刘颖,闵亚杰,姚绪涛. 速克冻干粉与马立克疫苗混合应用的效果观察.家禽科学, 2006,09:12-13。